免费论文摘要：拟黑多刺蚁extradenticle 基因的克隆及其在mRNA程度上的表白接洽

extradenticle(exd)基因首先是动作Hox基因的辅因子在果蝇渐变体中被创造的，它源代码的卵白属于PBC卵白家属分子。然而跟着接洽的深刻，越来越多的证明表白extradenticle有着更为普遍的心理效率，比方，它在节肢众生的附肢发育及虫豸的背板产生中起要害效率。拟黑多刺蚁(Polyrhachis vicina Roger)从属于膜翅目(Hymenoptera)，蚁科(Formicidae)，多刺蚁属(Polyrhachis)，是一种社会性虫豸和资源虫豸，其集体具备多态局面，等第分裂为兵蚁、雌蚁和雄蚁，动作搀杂、单干精确。本接洽以拟黑多刺蚁为试验资料，沿用RT-PCR, 5’与3’ RACE本领，克隆了extradenticle基因的全长cDNA序列；又运用底栖生物消息学本领对其举行了序列领会、进化联系领会和功效猜测；运用及时定量PCR本领对extradenticle在拟黑多刺蚁体内的mRNA程度表白举行了对立定量。所获试验截止为：1. 拟黑多刺蚁extradenticle基因 cDNA序列全长为1854bp，个中包括一个542 bp的5’端非源代码区(5’-UTR)、一个136 bp的3’端非源代码区(3’-UTR)和一个盛开观赏框(ORF)，其中断暗号坐落1716–1718位核苷酸。其盛开观赏框源代码319个氨基酸酸残基，底栖生物消息学软硬件领会其源代码卵白的表面等电点为6.53，分子量为42.7kDa，。将拟黑多刺蚁extradenticle的全长cDNA序列定名为Pvexd，并上传至GenBank数据库，所得序列号为GU223153。2. 序列比对，同源性领会表白PvEXD卵白与其余众生的extradenticle同源基因源代码的卵白的一致性介于58.5%和98.2%之间，个中与意大利蜜蜂EXD的氨基酸酸序列一致度最大，为98.2%。鉴于NJ法建立的进化树表露，PvEXD与蜜蜂的EXD先产生一支，而后与其余己知的虫豸EXD聚在一道，结果与脊椎众生PBX聚为一树。底栖生物消息学领会还表白，PvEXD卵白不是渗透型卵白。PvEXD卵白囊括一系列的功效位点：3个N型糖基化位点、2个cAMP盐酸化位点、4个酪卵白激酶II盐酸化位点、7个肉豆范酞基化位点、2个卵白激酶C盐酸化位点、1个酪氨酸激酶盐酸化位点。PvEXD卵白的二级构造为mixed型。3. 沿用荧光及时定量RT-PCR定量本领对extradentic在拟黑多刺蚁的各别发育阶段的所有虫体、各别等第的若虫虫体和各别等第的若虫头部的mRNA表白程度举行的对立定量领会的截止表露：从拟黑多刺蚁的发育进程来看，Pvexd在卵期的表白量较高。从卵到三龄总体上呈低沉趋向，但一龄到三龄的三个龄期表白分别在统计学上不明显，到四龄Pvexd表白量有所上升，在蛹期的表白量最低。到若虫后又有一鲜明增加。据Pvexd在拟黑多刺蚁的毛蚴虫体和若虫虫体内mRNA程度的表白分别性估计，PvEXD卵白经过安排细胞分裂、细胞凋亡和构造分裂，从而介入了个别发育的进程，或是在安排若虫比拟搀杂的动作中起到要害的效率。对于若虫的三个等第，不管在浑身或是在头部，Pvexd在兵蚁中的表白量都比雌蚁和雄蚁多，这大概与兵蚁特殊的等第分裂相关，或与兵蚁神经体例的产生相关。extradentic在雌蚁和雄蚁浑身中的表白量分别不明显，而在二者头部的表白分别明显，雄蚁中的表白量大概为雌蚁中的8倍。由此估计Pvexd大概在蚂蚁精虫爆发或卵子爆发，亦或是在与性别分裂相关的心理进程的调节和控制中起效率。本接洽初次从社会性虫豸——拟黑多刺蚁体内克隆出extradentic基因的全长cDNA序列，并将其序列上传至GenBank数据库；运用分子底栖生物消息学的本领，领会了extradentic基因的进化联系；经过荧光及时定量PCR举行的对立定量创造Pvexd mRNA在拟黑多刺蚁的各别发育阶段虫体、各别等第的若虫虫体和各别等第的若虫头部中的表白具备分别性。那些截止将会为进一步商量extradentic基因的功效及对虫豸发育爆发的效率和感化奠定普通。

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