免费论文摘要：黏着斑激酶表白对人结直肠癌细胞动作感化的接洽

摘 要结直肠癌是重要恫吓生人存在的罕见消化道恶性肿瘤，近20年来，其发病率在寰球大多国度呈逐年飞腾趋向。跟着生存前提的革新、茶饭欧化，我国结直肠癌发病率飞腾趋向特殊鲜明。肿瘤的爆发波及到原癌基因的激活和过表白、抑癌基因的渐变或失活等搀杂进程，人们从来试图把在肿瘤爆发进程中表现要害效率的基因动作靶点举行化装或控制以到达调节手段。跟着细胞及分子底栖生物学的兴盛，与结直肠癌关系的基因调节博得了较为鲜明的发达，很多新的靶点为结直肠癌发病体制的商量、确诊及调节供给了思绪。RNAi是近几年兴盛的一种高效的基因安静本领，在转录后水镇压制相映基因的表白。已有很多接洽表白RNAi有很强的控制手段基因的效率，比反义寡核苷酸控制手段基因的功效及潜心性更强。因为RNAi在接洽基因安静上面的宏大运用远景，更加是在基因调节、暗疾接洽、药物开拓上面的宏大后劲，RNAi 仍旧动作一种要害本领运用于抗肿瘤接洽。本舆论在归纳国表里接洽发达的普通上，运用对准FAK基因的siRNA质粒表白载体，效率于人结直肠癌Caco-2细胞株，运用RT-PCR、Western blotting、免疫性细胞化学、Hoechst 33258染色、MTT法及伤害建设法等本领，接洽其对FAK基因mRNA、卵白表白程度变革、细胞凋亡样式学变革、增殖及迁徙等上面的感化，博得了如次试验截止：1. 安排了4条对准FAK基因的siRNA靶序列和一条错义比较序列，送交公司建立siRNA重组子。2. 转染功效的优化：沿用脂质体Lipofectamine 2000包袱重组质粒pU6H1-GFP-siFAK转染Caco-2细胞，接洽了细胞育种密度、DNA用量、脂质体与DNA的比率、脂质体-DNA复合物的产生功夫、细胞与脂质体复合物的孵育功夫、血小板的有无及细胞的传代度数等成分对脂质体转染功效的感化，截止表白2～5次细胞传代，每试验单元2×105育种密度、4 µg DNA用量、2.5：1 (V：W)的脂质体与DNA比率、30 min脂质体-DNA复合物产生功夫以及6 h细胞与复合物孵育功夫，转染功效最高。血小板在本试验室前提下并不感化转染功效。3. 对FAK基因表白的感化：运用RT-PCR、Western blotting及免疫性细胞化学检验和测定FAK mRNA和卵白表白变革及功夫效力，截止创造FAK siRNA导出Caco-2细胞后，FAK mRNA和卵白表白程度鲜明下调，确定范畴内呈功夫依附联系，FAK mRNA程度下调在转染后48 h到达最大，卵白表白程度于转染后72 h到达最低，4个siFAK转染组均各别水平下调FAK 基因mRNA和卵白程度的表白，个中以siFAK3和siFAK4干预功效较为鲜明。同声免疫性细胞化学检验和测定截止也表露siFAK3、siFAK4转染Caco-2细胞48、72 h后FAK卵白被鲜明控制。4. 对Caco-2细胞动作的感化：运用Hoechst 33258染色、MTT和伤害建设法检验和测定Caco-2细胞在其FAK基因表白被灵验敲低后细胞凋亡样式、增殖、迁徙的变革，截止表白，经pU6H1-GFP-siFAK转染细胞后，细胞展现出典范的凋亡样式学变革，细胞增殖及迁徙本领鲜明受抑，并呈功夫依附联系。

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