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独叶草(Kingdonia uniflora Balf. f. et W. W. Smith)为星叶草科(Circaeasteraceae)有年生小草本,为华夏私有单种属植被,被名列国度Ⅰ级中心养护植被,具备要害的药用工效。独叶草健将在旷野情况前提下大多不许老练,重要依附根状茎尖端伸长繁衍,在其刻薄的存在情况里,天然革新本领差,加之报酬妨害丛林植被和采挖,天然情况的渐变等成分,其植株数目渐渐缩小,天然散布区日益减少。而其简单的繁衍办法又不许使其准时获得回复。本试验经过对濒临灭绝的危险药用植被独叶草构造培植的发端接洽,以期为其旷野种群数目夸大供给表面参考,进而为独叶草的养护开拓一条卓有成效的道路。同声,为了激动独叶草在构造培植进程中赶快成长,举行了独叶草内生真菌辨别审定的发端接洽。截止如次:1. 独叶草离体复活体制的创造在试验进程中,商量了各别外植体杀菌、各别基础培植基(MS、1/2MS、1/4MS、B5、N6、White)、各别荷尔蒙品种、浓淡及拉拢(各别成长素(NAA、2,4-D、IAA、IBA)、各别细胞分割素(6-BA、KT、ZT、TDZ))、各别温度普照效力和各别外植体对独叶草成长和分裂的简直效率。(1)外植体杀菌:经过用0.1%的升汞溶液和2%的次氯酸钠溶液对各别外植体在各别功夫下杀菌,创造根状茎用0.1%的升汞溶液杀菌3min较符合,老练叶片用2%次氯酸钠溶液杀菌1min较符合,老练叶柄用0.1%升汞溶液杀菌1min或2min较符合,芽苞用0.1%升汞溶液杀菌4min较符合。(2)外植体开辟:经过各别基础培植基、各别荷尔蒙品种、浓淡及拉拢对各别外植体的培植,创造1/4MS是较符合的基础培植基;幼叶柄是最符合的外植体,不妨开辟出愈伤构造、大概芽、大概根,而根状茎、老练叶柄、老练叶片、芽鳞片和幼叶片的开辟率均为零;幼叶柄仅在含有荷尔蒙2,4-D的培植基中不妨开辟出愈伤构造,但该愈伤构造简单褐化牺牲。2. 独叶草内生真菌的辨别审定(1)独叶草根外表和里面构造的查看:沿用扫描电子显微镜对独叶草根外表举行了查看,创造其根外表具备2个之上丝状物簇生区;经过白手切片,乳酸石炭酸棉蓝染色,对独叶草根里面构造举行了显微查看,独叶草根浮皮细胞内具备菌丝。(2)经过两次辨别,共获得5个菌株,按照菌落和菌丝特性、产孢构造、孢子样式等一系列审定,发端审定所获得的菌株重要属于子囊菌纲和半知菌类,个中半知菌类青霉属占上风。
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