论文摘要：高效液相色谱-固定化试剂化学发光检测在药物代谢方面的应用

肝脏是为异物解毒的主要器官，大多数的药物在体内发挥完其作用后，会在肝脏被分解，再经过肾脏或胆汁等排出体外。药物代谢主要有体内和体外两种方法，体内代谢法是指生命体服药之后，经过一段时间后分析其血液、尿液、胆汁或组织器官等生物样品，分离样品中药物及其代谢产物。这种方法综合考虑了体内因素对药物的影响，可以真实、全面地反映药物代谢的体内整体特征，但是弊端是难度较大。许多药物都广泛地分布在生物体内，再加上代谢转化时所在的器官和所需酶系的多样性，使得药物及其代谢产物在生命体内的浓度较低，对代谢产物的检测具有一定难度。相比之下，体外代谢法可以在短时间内可得到大量的代谢产物，并且可以方便地控制某些代谢条件，易于分离、提取代谢产物，尤其在代谢产物的结构确定方面优越性突出。但是体外代谢与生物体内的真实代谢情况存在一定差异，不能全面综合地反映体内的代谢情况。
研究药物代谢通常所用的方法为色谱串联质谱法。本研究以瑞格列奈(Repaglinide)为模型，在对瑞格列奈与钌(Ⅱ)联吡啶的发光反应研究的基础上，结合瑞格列奈本身的血浆半衰期短，并且可以在肝脏内完全被代谢的特点，运用高效液相色谱-固定化钌(Ⅱ)联吡啶化学发光技术，结合微透析取样，体外实时监测了降血糖药物瑞格列奈在肝细胞中的代谢过程。实现了在一个较短的时期内观察药物代谢情况。本论文同时还建立了其他几种药物的高效液相色谱-固定化钌(Ⅱ)联吡啶化学发光新方法，为今后研究这几种药物的代谢奠定了基础。
本论文分为两部分，第一部分为综述，第二部分为研究报告。
综述部分对近年来高效液相色谱-固定化钌(Ⅱ)联吡啶化学发光(HPLC-CL)联用技术的发展现状，微透析取样技术的原理、方法以及在生命科学中的应用，药物在肝脏中体外代谢的常用研究方法等进行了评述。
研究报告由三部分组成：
一、高效液相色谱-固定化试剂化学发光法结合微透析取样体外实时监测瑞格列奈在肝细胞中的代谢。
将高效液相色谱-固定化钌(Ⅱ)联吡啶化学发光技术运用到体外药物代谢领域，通过微透析取样技术将孵育在猪肝脏细胞内的瑞格列奈分离出来，避免了化学分离所带入的干扰。因所使用微透析管的截流分子量为30,000，肝脏内的一些小分子物质也会被透析出来干扰测定，所以将透析液在线注入高效液相色谱仪再次分离，流出液经过化学发光反应器，与固定在阳离子交换树脂上的钌(Ⅱ)联吡啶一起被酸性高锰酸钾氧化，从而产生化学发光。随着肝脏代谢过程的进行，透析出不同浓度的瑞格列奈与化学发光信号成正比关系，并通过与未经孵育的瑞格列奈透析液色谱图对比，可以观察到瑞格列奈在肝脏内被代谢的情况。
二、高效液相色谱-固定化试剂化学发光法测定人血清中的雷尼替丁
雷尼替丁和钌(Ⅱ)联吡啶在酸性高锰酸钾的氧化下可以产生化学发光，基于此，建立了高效液相色谱-固定化钌(Ⅱ)联吡啶化学发光检测人血清中的雷尼替丁的新方法，并成功用于人血清中雷尼替丁的测定。该方法的线性范围为：2.0×10-7-4.0×10-5 g/mL，检出限为?????????? 7×10-8 g/mL，对2.0×10-6 g/mL雷尼替丁连续11次平行测定的相对标准偏差为2.2%，结果令人满意。
三、高效液相色谱-固定化试剂化学发光法测定人血清中的芦氟沙星
基于芦氟沙星能增强钌(Ⅱ)联吡啶-Ce(Ⅳ)体系的化学发光强度，建立了高效液相色谱-固定化钌(Ⅱ)联吡啶化学发光检测人血清中的芦氟沙星的新方法，并成功用于人血清中芦氟沙星的测定。该方法的线性范围为：6.0×10-8-3.0×10-5 g/mL，检出限为3×10-8 g/mL，对5.0×10-7 g/mL芦氟沙星连续11次平行测定的相对标准偏差为1.6%，结果令人满意。

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