免费论文摘要：ANXA2 对人结直肠癌细胞动作的安排效率接洽

手段 基因敲除优于基因敲低的百般本领，是由于某些卵白大概在痕量的情景下即能实行其一定的心理功效。基因敲低不许实足去除靶卵白的表白后台，进而得出的试验截止具备不决定性。以是沿用基因实足敲除本领去接洽基因在细胞中功效。膜联卵白A2(AnnexinA2，ANXA2)属于膜联卵白家属的要害分子。该家属为一类具备钙离子螯合效率的磷脂卵白，它们介入了底栖生物体的多种心理和病理进程。暂时，在人和众生体创造了有12种膜联卵白家属分子，统称为ANXA。已有材料表露ANXA2的表白大概与结直肠癌等多种肿瘤的发病过程相关，并介入了心血管病症等多种病症的心理进程；而结直肠癌是生人格外罕见的恶性肿瘤。相关ANXA2在肿瘤的爆发、兴盛上面的接洽还不够，现有材料大多是以基因表白敲低的本领举行的，如许的接洽截止带有确定的不决定性。以是，为了真实地揭穿ANXA2在肿瘤更加是结直肠癌的兴盛进程中的效率，以人结直肠癌细胞系Caco2为靶细胞，对该细胞的ANXA2基因举行了敲除（knockout），赢得了ANXA2-/-Caco2细胞系，以野生型Caco2细胞（ANXA2+/+Caco2）为比较，接洽了ANXA2基因的表白对癌细胞的成长、疏通、凋亡的感化。本领 1. 从GenBank探求人ANXA2基因消息，经过clustalx1.83软硬件举行了序列比对，建立了ANXA2的基因敲除的重组子，用NotI控制性内切酶将重组子子线性化。2. 用水转染本领，将靶向ANXA2的基因敲除重组子导出Caco2细胞。经过有限细胞稀释法，在96孔板中培植单个细胞，把外源性基因EGFP（绿色荧光卵白，这边动作汇报基因）、neoR(G418抗性基因，这边动作细胞挑选基因)，插入到Caco2细胞基因组ANXA2基因外显子6使该基因表白实足中断，后以奇异性PCR和Westernblot审定基因敲除胜利，遂建系胜利。3. 以MTT法检验和测定靶向ANXA2基因敲除对Caco2细胞增殖的感化。4. 以全党外伤害建设法评介靶向ANXA2基因敲除对Caco2细胞疏通本领的感化。5.以Hoechst33258染色、MitoViewTM633染色贯串DAPI检验和测定靶向ANXA2基因敲除对Caco2细胞凋亡的感化。截止：1.安排了以ANXA2基因外显子6为插入位点的基因敲除本领并胜利的建立了ANXA2 pPNT/I1/I2/I3基因敲除重组子。2.用水转染本领、有限稀释法、抗性挑选，创造了ANXA2-/-Caco2细胞系。3. 以MTT法、伤害建设法检验和测定及Hoechst33258染色、MitoViewTM633染色贯串DAPI的截止表露，当ANXA2基因敲除后，Caco2细胞的增殖本领贬低（p论断：初次以ANXA2基因敲除的Caco2细胞（ANXA2-/-Caco2）接洽了ANXA2在肿瘤兴盛进程中的效率，创造敲除ANXA2基因后明显贬低Caco2细胞全党外增殖和疏通本领，然而对其凋亡爆发有鲜明分别。正文截止提醒ANXA2的表白在人结直肠癌的兴盛进程中表演有要害脚色，即激动了肿瘤的恶性兴盛进程。以是，敲除ANXA2基因对于肿瘤的提防、确诊和调节具备的潜伏的运用价格。

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