论文摘要：基于凝胶电泳的Lysobacter sp.SNNU513胞外抗菌蛋白分离分析和质谱鉴定

分泌蛋白质组 (secretome)指生物体在某种条件下分泌到细胞外的全部蛋白质，是蛋白质组内研究的一个重要分支。作为生命科学领域研究的一大热点，分泌蛋白质具有重要的生物活性，它随着细胞生命的活动表现出紧密协调的动态变化。蛋白质组学研究技术的不断发展，为揭示分泌蛋白质的生理功能和和细胞生命活动之间的联系提供了有力的平台。
高效、低毒、低残留的微生物农药已取得显著的生态和社会效益，在农业生产中具有巨大的经济价值。众多生防细菌在其生长发育过程中会产生许多拮抗性或者竞争性的代谢产物，具有阻碍或者杀死病原菌的效果，生防效果极佳。因此，从生防细菌中寻找农用活性的抗菌物质有着极为广阔的应用前景。
本实验室从药用植物远志根部筛选获得一株具有广谱抗菌活性的细菌，经鉴定为溶杆菌属细菌新菌株，命名为Lysobacter sp.SNNU513（NCBI JF445288.1）。研究表明该菌株胞外抗菌物主要是蛋白类物质，其胞外分泌蛋白对胶孢炭疽杆菌、烟草灰霉菌等多种植物病原菌的生长均有强烈的抑制作用。
本研究从样品制备方法、上样量、聚焦程序等方面，探究了优化Lysobacter sp.SNNU513胞外分泌蛋白双向电泳条件的方法，建立了理想的胞内、胞外蛋白双向电泳图谱。在初步掌握了胞外蛋白基本信息的基础上，结合超滤和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对胞外分泌蛋白实现快速分离，通过凝胶回收得到具有抗菌活性的蛋白条带6号和7号。对回收蛋白质进行质谱鉴定分析：（1）通过双向凝胶电泳技术分离6号凝胶条带回收的蛋白，对所得的2-DE图谱中的蛋白质点,进行胶内酶切后,再通过串联质谱对18个蛋白点进行鉴定分析，成功鉴定出12个蛋白点；（2）采用shot-gun技术对凝胶条带7回收的蛋白进行鉴定，鉴定出24个蛋白点。通过两种方法的结合鉴定出的蛋白点中有4个蛋白点具有潜在的抗菌活性，分别是a-Lytic protease、subtilisin savinase、β-lytic protease和soluble lytic murein transglycosylase。
本研究以溶杆菌属新菌株Lysobacter sp.SNNU513为研究材料，以聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱技术为平台，探究并分析鉴定出该菌株具有抗菌活性的胞外分泌蛋白，为进一步寻找具有巨大应用潜力的生防因子奠定了基础。

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