免费论文摘要：华夏林蛙催乳素及其受体的克隆、序列领会和反常功夫的表白形式审定

为了商量催乳素（prolactin，PRL）和催乳素受体（prolactin receptor，PRLR）在两栖众生反常进程中表现的效率，本接洽开始对华夏林蛙（Rana chensinensis）的 PRL 以及 PRLR 的 cDNA 举行了克隆审定，并辨别检验和测定了 PRL 在脑的表白以及PRLR 在肝、尾、皮、肾中的表白，进一步领会了二者在林蛙反常进程中承担的脚色。 1.所赢得的 PRL cDNA 由 645-bp 的盛开观赏框（open reading frame，OPF）形成，由之推导的多肽序列共源代码 214 个氨基酸酸(amino acid，aa)残基。经 SignalP 猜测，其包括 27 aa 的旗号肽序列。分子量为 24313.6 Da，pI 为 6.07；其余，所赢得的 PRLR  cDNA 由 29-bp 的 5′-UTR，237-bp 的 3′-UTR 以及 1854-bp 的 ORF 形成，由之推导的多肽序列共源代码 617 个氨基酸酸残基。经 SignalP 猜测，其包括 26  aa 的旗号肽序列。分子量为 69298.6  Da，pI 为 5.59。从而对 PRLR 多肽序列举行跨膜域检验和测定创造，其包括 22  aa 的单次跨膜域，所以 PRLR 多肽被分别为胞外域（extracellular domain，ECD），跨膜域（transmembrane domain，TMD）和胞内域（intracellular domain，ICD）三局部。 2.多肽序列比对截止表白，rcPRL 包括 3 对顽固的 Cys 残基。但是，因为第1对 Cys 残基坐落旗号肽序列内，其在卵白老练进程中被去除。所以，惟有第 2、3对产生两个二硫键。其余，后两对 Cys 残基的对立场所在脊椎众生中也是莫大顽固的。二级构造猜测表白，rcPRL 包括 4 个 α 电钻。比对截止还表露，rcPRL 含有两个顽固的基序，即 motif 1 和 motif 2。二者辨别由 34 aa 和 18 aa 形成；在rcPRLR中，同样创造了少许顽固的基序，囊括两对顽固的 Cys 残基（site  38，48，77 和88），WS motif，三个潜伏的 N-糖基化位点（site 61，114 和 134），以及 Box 1和 Box 2。一切那些特性都与喂奶众生的长型 PRLR 普遍。比拟较而言，PRLR 的ECD比 ICD更为顽固：在各物种间，ECD 的普遍性为 48-92%，而 ICD 则为 38-95%。 3.对 rcPRL 和其余脊椎众生 PRL 间的亲缘联系，以及 rcPRLR 和其余脊椎众生 PRLR 间的亲缘联系比较后，截止表白两者间的普遍性联系基础普遍：rcPRL 与两栖类、鸟类和匍匐类、喂奶类的普遍性辨别为 80-97%、70-75%、48-73%，rcPRLR与两栖类、鸟类和匍匐类、喂奶类的普遍性辨别为 53-94%、44-47%、42-47%。这表示着在华夏林蛙，rcPRL 与 rcPRLR 大概是共同进化的。4.除华夏林蛙及其余无尾两栖类外，在有尾两栖类，匍匐类，鸟类和喂奶类傍边都创造了一个顽固的 His 残基，而此残基与 pH 依附性受体辨别精细关系，这表白囊括林蛙在前的无尾两栖类的 PRLR 辨别进程大概并非是 pH 依附性的。 5.除 Trichosurus vulpecula 和 Myotis davidii 外，囊括华夏林蛙在前的绝大普遍物种中均创造了 DSGRGS motif。接洽表白此基序与长型 PRLR 的泛素依附性降解休戚相关。这表白 rcPRLR 的降解大概也是泛素依附性的。 6.经过 RT-PCR 本领检验和测定了 rcPRL 和 rcPRLR mRNA 的表白形式。从预反常期至反常后期（41-46 期），rcPRL 在脑中连接表白，并表露出连接巩固的趋向。rcPRLR在肝脏中的表白完全而言较为微漠，但在反常顶峰期赶快巩固，表白在反常前期肝脏不是 PRL 的重要靶器官；rcPRLR 在皮肤和尾中连接高表白，这大概是由于其介入了皮肤的浸透安排和尾的蜕化接收进程；而 rcPRLR 在肾脏中的变革趋向则大概与肾脏的反常进程相关。总之，rcPRL 和 rcPRLR 的表白形式均扶助了“在两栖众生反常进程中 PRL 的效率并不一致于 JH（juvenile hormone）”这一看法。 

来源：半壳优胜育转载请保留出处和链接！

本文链接：http://www.87cpy.com/214628.html